血红蛋白测定

　　要点：

　　检测原理：血液中血红蛋白以各种形式存在，包括：氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白(Hi)或其他衍生物。采用比色法测定，包括：氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法、十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS)测定法、叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法、碱羟血红蛋白法、溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法等。

　　HiCN测定法原理：血液中除硫化血红蛋白(SHb)外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白，其在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，经换算即可得到每升血液中的血红蛋白浓度，或通过制备的标准曲线查得血红蛋白浓度。

　　要点：方法学评价

　　1.HiCN法：1966年被ICSH推荐为参考方法。

　　2.SDS测定法：该法具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂的质量差异较大会影响检测结果。

　　3.多参数血细胞分析仪：优点是操作简单、快速，同时可获得多项红细胞参数，血红蛋白测定原理与手工法相似，仪器法测定精度(CV)约为1%。

　　要点：

　　质量控制

　　1.样本：异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。

　　2.采血部位：部位不同，结果不同，静脉血比毛细血管血低10%～15%。

　　3.结果分析：测定值假性增高的原因是稀释倍数不准、红细胞溶解不当、血浆中脂质或蛋白质量增加。

　　4.HiCN参考液：是制备标准曲线、计算K值、校准仪器和其他测定方法的重要物质。

　　ICSH公布了制备方法和规格，我国HiCN部级参考品质量标准为：

　　(1)图形扫描波峰(540±1)nm，波谷502～504nm。

　　(2)Aλ540nm/Aλ504nm=1.590～1.630。

　　(3)Aλ750nm≤0.002。

　　(4)无菌试验：普通培养和厌氧培养阴性。

　　(5)精密度：随机抽样10支测定，CV≤0.5%。

　　(6)准确度：以WH0的HiCN参考品为标准进行测定，测定值与标示值之差≤±0.5%。

　　(7)稳定性：3年内不变质，测定值不变。

　　(8)分装于棕色安瓿内，每支不少于10ml。

　　(9)标签应写明产品名称、批号、含量、有效期、生产日期、贮存法等。

　　5.质控物

　　常用质控物有：ACD抗凝全血、进口全血质控物、醛化半固定红细胞、溶血液和冻干全血等。

　　要点：

　　参考值：成年：男性120～160g/L;女性：110～150g/L。新生儿：170～200g/L。老年(70岁以上)：男性94.2～122.2g/L;女性86.5～111.8g/L。

　　要点：

　　生理性变化

　　(1)年龄：随年龄增长，Hb可增高或减低，和红细胞变化相似。

　　(2)时间：红细胞和血红蛋白量有日内波动，上午7时达高峰，随后下降。

　　要点：病理性变化

　　(1)某些疾病，血红蛋白和红细胞浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量。如大量失血时，在补充液体前，虽循环血容量缩小，但血液浓度很少变化，从血红蛋白浓度来看，很难反映出存在贫血。如水潴留时，血浆容量增大，即使红细胞容量正常，但血液浓度减低，从血红蛋白浓度来看，已存在贫血，反之，失水时，血浆容量缩小，即使血液浓度增高，但红细胞容量减少，从血红蛋白浓度来看，贫血不明显。

　　(2)发生大细胞性贫血或小细胞低色素性贫血时，红细胞计数与血红蛋白浓度不成比例。大细胞性贫血的血红蛋白浓度相对偏高，小细胞低色素贫血的血红蛋白减低，但红细胞计数可正常。