初级临床医学检验复习指导:红细胞检查​​​​​​​

2018年10月08日 来源:来学网

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红细胞检查

红细胞检查内容:

RBC是血液中最多的一种血细胞,其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。

形态:无核,双凹圆盘形 不染色:呈草黄色

RBC的生成及破坏:(见PPT)

早幼红细胞 中幼红细胞 干细胞原始红细胞 晚幼红细胞 网织红细胞 成熟红细胞

一、红细胞计数(red blood cell count)

【原理(principle)】

血液用等渗稀释液稀释一定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数一定范围内的RBC

数→换算得每升血液中的RBC数。

【参考范围(range)】

成年女性:(3.5~5.0)×1012/L

成年男性:(4.0~5.5)×1012/L

新生儿:(6.0~7.0)×1012/L

婴儿:(4.0~4.3)×1012/L

儿童:(4.0~4.5)×1012/L

【临床意义(clinical meaning)】

一、生理性变化

(一)生理性增多

1.机体缺氧而使RBC代偿性↑:新生儿、高原生活、强烈的体力劳动

2.成年男性比女性高:男性在6~7岁时最低,25~30岁时达高峰。女性21~35岁维持最低水平。

3.其他:抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等

(二)生理性减少

1.生长发育造血原料相对不足:从6个月至2岁婴幼儿

2.造血功能减退:部分老年人生理性贫血

3.血容量增加:妊娠中晚期

二、病理性变化

(一)病理性增多

1.相对增多:血液浓缩

2.绝对性增多:①继发性增多:如心肺疾病②原发性增多:如真性RBC增多症

高于6.8×1012/L应采取治疗措施

(二)病理性减少

1.RBC生成减少:※骨髓功能衰竭:AA ※造血物质缺乏或利用障碍:IDA、MA

2.RBC破坏过多:※内在缺陷 ※外在异常

3.RBC丢失过多:低于1.5×1012/L应考虑输血

二、血红蛋白测定Hemoglobin measurement

(一)Hb分子结构及成分:

血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质,由珠蛋白和亚铁血红素组成。

0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。

4.其它:

①还原Hb:Fe2+

②氧合Hb:与O2结合的Hb

③Hb衍生物:HbCO、SHb

④高铁Hb:Fe3+

2014年6月17日59P24

(二)Hb的测定:

ICSH(International council for standardization haematology)推荐氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN)

1.原理:Hb是色素蛋白,在血液中以多种形式存在,利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白(Hi),Hi可与CNˉ结合成氰化高铁血红蛋白,在540nm处有一吸收峰,用分光光度计测定其吸光度,换算成每升血液中血红蛋白的含量。

方法学评价

(1)氰化高铁血红蛋白测定法

优点:①操作简单、显色稳定,便于推广。

②转化液较稳定,易保存。

③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。

④HiCN参考品可长期保存,便于质控。

缺点:①KCN剧毒,易污染环境。

②不能测SHb,HbCO转化慢。

③浊度高引起Hb浓度假性增高:高球蛋白血症,脂血,试剂混浊,WBC和Plt高。

(2)十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)测定法

SDS能破坏WBC,摩尔消光系数未定。

(3)碱羟血红蛋白测定法:

HbF不能转化,最大吸收峰在575nm。

(4)叠氮高铁Hb测定法:

具有与HiCN法相似的优点,但仍存在试剂污染。

(5)溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法:

不破坏WBC,精密度、准确性略低。

2014年6月17日65P25

4.参考值

新生儿:170~200g/L女:110~150g/L

男:120~160g/L

70岁以上老年人:男:94~122g/L女:87~112g/L

质量控制(1)血清浊度:(2)器材及试剂质量:(3)技术与操作:(4)废弃物的处理:

临床意义与RBC计数相似

(1)鉴别贫血类型:

IDA:RBC↓Hb↓↓MA:RBC↓↓Hb↓

(2)影响检验结果的因素:血液总容量改变全身血浆容量改变

教学目标:

掌握:血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义;网织红细胞的形态、计数

方法及测定的临床意义。

熟悉:血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。

了解:Hb测定的方法学评价。

血红蛋白测定Hemoglobin measurement

(一) Hb分子结构及成分:

血红蛋白( hemoglobin,Hb或HGB )是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质,由珠蛋白和亚铁血红素组成。

血涂片制备与染色

血涂片的制备

(一)载玻片和推片:

载玻片推片

载玻片:清洁、干燥、中性、无油腻。

推片:边缘光滑。

(二)血涂片制作:

良好血涂片:

①血膜至少长25mm。

②边缘整齐,两侧、两端留有空隙。

③头体尾分明:细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。

④血膜末端无粒状、画线或裂隙。

(三)制备血涂片的影响因素

推制适当的血膜角度大,速度快→太厚,太短

推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀

血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻

血涂片染色

染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。

1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。

2.吉姆萨染色法

3.瑞氏吉姆萨复合染色法

4.细胞活体染色法

5.巴氏染色法

6.苏木素-伊红染色法

(一)瑞氏染色法(Wright Stain)

1. 瑞氏染料成分:

⑴ 美蓝(又称亚甲蓝 ,methylene blue,M+)

通常为氯盐,氯化美蓝(MCl),阳离子,一种碱性染料。

⑵ 伊红(eosin Eˉ):

通常为钠盐(NaE),阴离子,一种酸性染料。

⑶ Wright染料

MCl + NaEME+ NaCl

⑷ 甲醇(溶剂、固定剂):

① MEM+ + Eˉ

② 具有强大的脱水力。

可将细胞固定为一定形态;使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构;增强染色效果;

染色原理:物理的吸附作用 和化学的亲和作用

正常情况染色结果:

外观:淡紫红色

镜下:① RBC呈粉红色,略有碟状感。

② WBC浆中颗粒清楚,并显示各种细胞特有的色彩。

③ 细胞核染紫红色,核染色质结构清楚。

RBC嗜碱性颗粒 中性颗粒 嗜酸性颗粒

3. PH对细胞染色的影响:

PH↓→ 正电荷增多→ 易与伊红结合 →染色偏红

PH↑→ 负电荷增多→ 易与美蓝结合 →偏蓝

染色的质量保证

染液质量

染色时间与染液浓度

染色过程

染液的冲洗

脱色与复染

4.方法学评价:

瑞氏染色法:

优点:对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果,

缺点:对细胞核的染色不如吉姆萨染色

吉姆萨染色:

原理:同瑞氏染色。

优点:本法对细胞核染色较好,结构更清晰。

缺点:胞质和中性颗粒染色较差。

瑞-吉复合染色:取长补短。

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