尚未戴无菌手套的手，只允许接触手套套口向外翻折的部分，不能碰到手套的外面；已戴一只手套的手，不可接触另一手套的内面和未戴手套的手。无菌手套有干、湿两种，以干手套最为常用。
1．戴干手套法 先穿无菌手术衣，用手套袋内无菌滑石粉包轻轻敷擦双手，使之光滑。用左手白手套袋内捏住两只手套的翻折部提出手套，使两只手套拇指相对向。先用右手插入右手手套内，再将戴好手套的右手2～5指插入左手套的翻折部内，让左手插入左手套中，然后将手套翻折部翻回套压住手术衣袖口。用无菌盐水冲净手套外面的滑石粉。在手术开始前，应将双手举于胸前，切勿任意下垂或高举。

2．戴湿手套法 在灭菌手套内先盛放适量的无菌清水，使手套撑开，手易于伸入。选取适合自己手大小的手套，解开灌有清水手套套口的绳结。以左手拇指、食指及中指提住撑开套口，迅速将右手伸入右手套内，使各指尖直达手套指部之顶端，然后将右手腕向上背伸，使手套中积水向腕下方流出。再用右手指插入左手套的翻折部，并提起，将左手同上法插入手套中，使水依右手方法从腕下部排出。戴好湿手套后，再穿无菌手术衣。
手术人员做完一台手术，需继续做另一台手术时，可按下列步骤更换手套和手术衣：①洗净手套上的血渍、污物，先脱手术衣，后脱手套，注意双手皮肤不得接触手套外部及其他物品，以免受污染；②在流动清水下冲洗双手，用无菌毛巾拭干；③在70％酒精或0．1％新洁尔灭等消毒溶液中浸泡双手、前臂5分钟，待干；④再按上述方法重新穿无菌手术衣及戴手套；⑤若刚完成的是感染手术或手套有破损，则须按常规重新洗手进行手臂消毒。