红细胞AB0血型系统

　　(一)AB0血型系统的抗原及抗体检查

　　1.ABO血型抗原

　　要点：

　　AB0抗原的遗传座位在第9号染色体的长臂3区4带，有A、B、O三个等位基因。A和B基因对于0基因而言为显性基因，0基因为隐性基因。父母双方如各遗传给子代一个基因，则可组成6个基因型;O0、AA、A0、BB、BO、AB;4种表现型：A、B、O、AB。

　　要点：

　　5～6周胎儿红细胞已可测出ABH抗原。新生儿A、B抗原位点较成人少，一般在生后18个月时才能充分表现出抗原性，但抗原性也仅为成人的20%。此外，ABH抗原频率亦随种族而不同。所谓H抗原是形成A、B抗原的结构基础。

　　要点：

　　ABH抗原不仅存在于红细胞膜上，也可存在于白细胞、血小板及其他组织细胞上。ABH血型特异物质存在于唾液(含量最丰富)、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为“血型物质”。

　　要点：

　　血型物质意义：

　　①测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。

　　②中和AB0血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。

　　③检查羊水可预测胎儿AB0血型等。

　　2.AB0系统抗体

　　要点：

　　AB0系统抗体分天然抗体与免疫性抗体：天然抗体是在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体;也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、IgA的混合物，但主要是IgM，而0型血清中以IgG为主。

　　要点：

　　天然抗体和免疫抗体的主要区别：

　　(1)天然抗体能被血型物质中和，而免疫性抗体则不能;

　　(2)天然抗体在盐水中能与相应红细胞发生肉眼可见凝集，而免疫性抗体则不能;

　　(3)天然抗体不通过胎盘，而免疫性抗体能通过胎盘。

　　要点：

　　O型人血清中不仅有抗A、抗B抗体，还含有一种抗A、B抗体。它与A型或B型红细胞都能凝集，但当用A或B型红细胞分别吸收时，不能将其分为特异的抗A和抗B。所以，不可能在抗A和抗B的混合液中找到抗A、B具有的血清学活性。这可能是O型血清中的抗A、B是一种直接针对A和B抗原的共同抗体结构。

　　(二)AB0血型系统的亚型

　　要点：

　　AB0血型系统中以A亚型最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型(A3、AX、AM)为数少;作AB0血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。B亚型(B3、BM、BX)比A亚型少见，临床意义不大。

　　要点：

　　A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗体;A2亚型的红细胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。在直接凝集反应中，A1、A2亚型两种红细胞的A1与A2抗原均能与抗A试剂发生凝集反应。但抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和0型人的血清中除含抗A外还有抗A1，所以可以从B型人血清中获取抗A1试剂。

　　由于A抗原中A1、A2两种主要亚型，AB型也有A1B和A2B两种主要亚型。

　　A1B红细胞上有A1、A、B三种抗原

　　血清中无任何抗体

　　要点：

　　A1、A2亚型的鉴定方法：以抗A1试剂可区别Al、A2血清，方法是：①可从B型人血清获取抗A1试剂，B型血清有抗A、抗A1，其中抗A抗体能与A型红细胞的Al、A2抗原凝集，如吸收抗A，就只剩下抗A1。②鉴定A1、A2亚型，凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型;不与抗A1试剂凝集者，为A2或A2B型。

　　鉴定A1、A2亚型，应用抗A1血清。

　　要点：

　　A1、A2亚型鉴定的意义：目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为O型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。因此，应避免将弱的A亚型定为0型。

所以，必须避免将弱A亚型误判为O型。

　　如：Ax型红细胞与B型血清(抗A抗体)不发生凝集，但与0型血清可发生程度不一的凝集，这可能是因为0型血中抗A效价比B型血抗A效价高，故现做AB0血型鉴定时，应加0型血清(内含抗A、抗B及抗AB)，以防将Ax型误定为0型。

　　(三)AB0血型鉴定

　　要点：

　　常用盐水凝集法：

　　①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。

　　②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。

　　结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见下表。

　　ABO血型定型

　　要点：

　　玻片法凝集结果判断：玻片法凝集结果是以凝块大小和游离红细胞多少综合判定的。

　　要点：

　　注意事项：红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用0型(抗A、B)血清和反向定型，可避免此类错误。

　　要点：

　　鉴定方法

　　(1)生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

　　(2)凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。

　　要点：

　　抗A、抗B和抗AB标准血清

　　标准血清均采自健康人，并应符合下述条件：

　　①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。

　　②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。

　　③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s;抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。

　　④冷凝集素效价：在1：4以下。

　　⑤无菌。

　　⑥灭活补体。

　　要点：

　　血型鉴定操作时注意事项：

　　①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。

　　②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。

　　③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。

　　④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。

　　⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。

　　⑥正、反定型结果一致才可发报告。

　　⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失;血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难。

　　新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及(或)抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。

　　练习题

　　在B型和O型血人的血清中除含抗A外，还有

　　A.抗A1

　　B.抗A2

　　C.抗A3

　　D.抗Ax

　　E.抗Am

　　【正确答案】A

　　关于A亚型鉴定，如果能与抗A1和抗B试剂同时发生凝集反应则鉴定为

　　A.A1型

　　B.AB型

　　C.A1B型

　　D.A型

　　E.A2B型

　　【正确答案】C

　　ABO血型鉴定时，应加O型血清的目的是

　　A.提高效率

　　B.加快速度

　　C.以防将Ax型误定为O型

　　D.以防漏诊B亚型

　　E.以防误诊AB型

　　【正确答案】C

　　解析：

　　AB0血型系统中以A亚型最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型(A3、AX、AM)为数少;红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用0型(抗A、B)血清和反向定型，以防对A亚型误定型。

　　玻片法做ABO血型鉴定时，如果肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为

　　A.-

　　B.±

　　C.1+

　　D.2+

　　E.3+

　　【正确答案】C

　　关于血型鉴定的标准血清质量标准的叙述，错误的是

　　A.抗A和抗B血清效价均在1：128以上

　　B.抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是45s、30s和15s

　　C.抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s

　　D.凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2

　　E.冷凝集素效价：在1：4以下

　　【正确答案】B

　　(四)交叉配血法

　　要点：

　　盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。

　　抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。

　　要点：

　　直接抗球蛋白法可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏;间接抗球蛋白法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。

　　要点：

　　试剂：抗球蛋白试剂盒：包括抗广谱、抗C3、抗IgG等3种试剂。

　　阳性对照：IgG型抗D致敏5%RhD阳性红细胞生理盐水悬液。

　　阴性对照：正常人5%O型红细胞生理盐水悬液。

　　要点：注意事项：

　　①标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。

　　②抗人球蛋白血清应按说明书最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误为阴性结果。

　　③阴性对照凝集：可能是抗人球蛋白血清处理不当，仍有残存的种属抗体，或被细菌污染，应更换血清重做试验。

　　核实阴性结果方法：在该试管中加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清未被消耗，阴性结果可靠。

　　④阳性对照不凝集：可能是抗人球蛋白血清或用于致敏红细胞的不完全抗D血清失效，或红细胞未洗净带人球蛋白所致，应更换血清或洗净红细胞后重做。

　　⑤如需了解体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。

　　要点：

　　聚凝胺法配血法：可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。

　　配血原理：聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。

　　当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胶的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生凝集不会散开。如血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。

　　要点：

　　凝胶配血法：又称微管(板)凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确、具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。

　　要点：

　　其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。卡式配血/血型鉴定检测法已成为国际安全输血检查的推荐方法。

　　要点：

　　质量控制

　　(1)血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。

　　(2)选用方法：用试管法做交叉配血。

　　(3)溶血现象：配血管出现溶血现象，为配血不合。

　　要点：

　　AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误

　　1.分型血清方面的原因

　　(1)患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管(瓶)，误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。

　　(2)患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物：可引起红细胞聚集，易误认为凝集。

　　(3)血清中可能存在的不规则抗体：如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有抗Ⅰ抗体等。有些癌症患者(如胃癌、胰腺癌等)血中含有大量可溶性A或B物质，这些物质可中和抗血清的抗体，从而抑制反应。造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。

　　(4)婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体：新生儿不宜用血清作反定型。

　　(5)老年人血型抗体水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型错误。

　　要点：

　　红细胞方面的原因

　　(1)用近期内输过血的患者血液做对照红细胞：此时，患者血液红细胞为混合型细胞。

　　(2)患者红细胞被大量抗体包被：例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。

　　(3)红细胞膜有遗传性或获得性异常。

　　(4)抗原变异：A或B的弱抗原易判为不凝集(假阴性)，而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。

　　(5)血清中有高浓度血型物质：当用血清配制红细胞悬液时，血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。

　　(6)红细胞被细菌污染：细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。

　　(7)嵌合体现象：混合细胞群见于异卵双生子。如，有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。

　　要点：

　　操作方面的原因：是最常见原因。

　　(1)操作器材：玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞，可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。

　　(2)红细胞与血清比例和离心：红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。

　　(3)溶血现象：误认为溶血现象为阴性结果。

　　(4)试验温度：温度过高会造成假阴性。ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4℃～22℃，如达37℃凝集力即下降。

　　(5)信息记录差错：标本、试剂、标签、加样弄错，或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本号，张冠李戴最易造成错误。

　　要点：

　　AB0血型系统主要临床意义

　　1.输血：是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血。

　　2.新生儿溶血病：母婴AB0血型不合引起的新生儿溶血病(常为第1胎溶血)，主要依靠血型血清学检查作出诊断。

　　3.器官移植：受者与供者必须AB0血型相符才能移植。

　　习题

　　盐水介质交叉配血时，当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集反应，则血清中的抗体是

　　A.IgM

　　B.IgG

　　C.IgE

　　D.IgA

　　E.IgA+IgE

　　【正确答案】A

　　交叉配血用酶介质法，其中酶的作用是

　　A.在红细胞膜表面之间起桥梁作用

　　B.在致敏抗体之间起桥梁作用

　　C.中和红细胞表面电荷

　　D.改变致敏抗体结构

　　E.破坏红细胞表面的唾液酸分子

　　【正确答案】E

　　某些细菌性感染的患者，之所以A型血被鉴定为AB型，是因为

　　A.红细胞被大量抗体包被

　　B.特异性A型物质末端N-乙酰胺基半乳糖水解成半乳糖

　　C.A或B抗原变弱

　　D.细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出T抗原

　　E.红细胞血型出现嵌合体

　　【正确答案】B

　　【解析】ABO血型鉴定和交叉配血时常常因为分型血清和对照红细胞两方面的原因产生错误。本题涉及的是对照红细胞方面的问题：细菌可以使红细胞表面发生变化，从而影响血型鉴定和交叉配血。一种情况是有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端N-乙酰胺基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得B抗原后易误定为AB型;另一种情况是细菌污染红细胞，细菌的细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。本题是前一种情况。

　　AB0血型系统的IgM抗体最适温度为

　　A.4℃

　　B.22℃

　　C.4℃～22℃

　　D.37℃

　　E.25℃

　　【正确答案】C