【摘要】根据“中国卫生人才网：2020年全国卫生专业技术资格考试推迟”通知可知，原定于5月23、24、30、31日举行的卫生专业技术资格考试推迟举行。具体考试时间另行通知。考试延迟，但是备考刻不容缓！小编整理了2020年卫生资格考试微生物检验技士知识点相关信息，以供各位考生参考，预祝各位考生考试顺利。

革兰染色两步法

实验目的

比较革兰染色两步法与传统四步法对阴道分泌物涂片标本染色的临床意义。 方法 收集了100例主诉外阴瘙痒和阴道病患者的阴道分泌物的标本，对其涂片分别采用二步革兰染色两步法和革兰染色四步法进行染色，并对结果比较。结果 两种染色方法的比较无显著性差异 结论 新两步法可以替代四步法，值得推广应用。

阴道炎是妇科门诊常见的病症之一。确诊主要是依据实验室对阴道分泌物的病原学检查。阴道分泌物涂片染色法是常用的方法之一。但传统的革兰四步染色法，操作繁琐，时有误差。为进一步探索新的革兰染色两步法与传统四步法对临床标本染色的差异及其意义，2007年7月到11月作者收集了100例（20-55岁)主诉白带增多，有异味，外阴瘙痒妇科门诊患者阴道分泌物的标本，对其涂片分别采用新的革兰染色二步法和传统的革兰染色四步法，并对结果进行了比较。结论两种方法的结果比较无显著性差异。说明临床标本采用新型的革兰染色两步法的染色结果完全可以替代经典的革兰染色四步法。

材料与方法：

1.对象

100例阴道分泌物标本均取自医院妇科门诊。检测试剂：革兰两步法染色液。

2.每份标本涂片两张，一张做新的革兰两步法染色，另一张做传统革兰四步法染色。革兰氏染色两步法

步骤：以消毒棉签蘸取阴道后穹隆及宫颈管处的分泌物制成涂片，涂片时将拭子在玻片上稍用力滚动一周，后用95%泌物的乙醇固定，自然干燥。加入新型的革兰染色两步法的A液（兰色)1-2滴使之盖满涂膜，染色15秒后，清水冲洗，再加入B液（红色)1-2滴使之盖满涂膜，染色15秒后，清水冲洗后自然干燥，油镜镜检。革兰氏染色四步法步骤：以消毒棉签蘸取阴道后穹隆及宫颈管处的分泌物制成涂片，涂片时将拭子在玻片上稍用力滚动一周。涂片干燥后经火焰加热固定，加入染色液。龙胆紫液染色10秒后水洗，甩干。碘溶液染色10秒后水洗，甩干。脱色液脱色10秒后水洗，甩干。沙黄溶液复染10秒后水洗，自然干燥，油镜镜检。

结果： 在念珠菌性阴道炎中，可见明显的菌丝相，孢子相，菌丝胞子双相的涂片染色。二步法与四步法均可见霉菌孢子呈西瓜子样，镜下可找到成群革兰阳性浓染的卵圆形孢子，可见芽生孢子和假菌丝（细长而直，有分枝或者隔，呈节段状，形状似竹竿)两步法的视野清晰，未见明显杂质。在细菌阴道炎中，二步法染色可见紫蓝色的棒状乳酸杆菌大量减少，可发现有大量深紫色小杆菌或球状杆菌聚集在淡红色上皮细胞上形成其边缘灰暗呈锯齿状的线索细胞。上皮细胞，浆丰富，染成淡红色，边缘色深，视野清晰，小杆菌及球状杆菌染成深蓝色。总体来说阴道分泌物涂片四步法染色与两步法相比基本无差异。