封闭包被的蛋白质浓度过低，固相载体表面不能被此蛋白质完全覆盖，其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异性显色致本底偏高，在这种情况下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。