HRP最敏感的色原底物，在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。其反应液稳定性差，易变色，需在配置后1小时内使用，显色反应过程需避光，且具有致癌性。4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)常用作β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物，酶作用后生成高强度荧光物4-甲基伞形酮(4-MU)，测量时需用荧光剂。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。对-硝基苯磷酸酯经AP作用后产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。