双位点一步法是在双抗体夹心法的基础上进一步发展起来的，测定时将含待测抗原标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经过一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。但当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应（Hook effect），显色降低，严重时可出现假阴性结果。必要时可将标本经过适当稀释后重复测定。