在阴性菌中，庆大霉素对大肠杆菌、变形杆菌、嗜血杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和布鲁氏菌等均有较强的作用，特别是对肠道菌及绿脓杆菌有高效。在阳性菌中，庆大霉素对耐药金葡菌的作用最强，对耐药的葡萄球菌、溶血性链球菌、炭疽杆菌等亦有效。此外，对支原体亦有一定作用。