切口平移法是目前实验室中最常用的一种DNA探针标记方法。其原理是利用DNA酶I在DNA双链上随机切割单链，造成单链切口，切口处产生一个5′末端和一个3′末端，3′末端即可作为引物。利用大肠杆菌DNA聚合酶I的5′→3′核酸外切酶活性在切口处将旧链从5′末端逐步切除。同时，在DNA聚合酶I的5′→3′聚合酶活性的催化下,依次将dNTP连接到切口的3′末端-OH上，以互补的DNA单链为模板合成新的DNA链。