连续监测法测定 LD，常通过监测 340nm 波长吸光度的变化来计算酶的活性。因为 LD 催化乳酸生成丙酮酸和 H⁺，H⁺由 NAD⁻结合，生成 NADH，NADH 在 340nm 处有特征性光吸收，而 NAD⁺在 340nm 处没有特征性光吸收，可通过连续监测 340nm 处吸光度的升高速率来计算 LD 活性浓度。