选项A：PCR技术可检测病毒核酸，敏感性高，但存在假阳性可能，不是最可靠方法，故A项不正确。选项B：分离病毒是直接从患者标本中培养出病毒，是确诊病毒感染最可靠的方法，能直接证明病毒的存在，故B项正确。选项C：血清学诊断是通过检测抗体来推断是否感染病毒，但抗体产生需要一定时间，且可能存在假阳性或假阴性，不是最可靠的，故C项错误。选项D：核酸杂交技术用于检测病毒核酸，同样存在假阳性等问题，不是最可靠的诊断方法，故D项错误。选项E：直接检查病毒如电镜观察等，可能因病毒量少等原因难以准确检测，可靠性不如分离病毒，故E项错误。